Sissejuhatus tavalisse mikroobikultuuri söötmesse (I)

Sissejuhatus tavalisse mikroobikultuuri söötmesse (I)

Kultuurisööde on omamoodi segatud toitainemaatriks, mis on kunstlikult valmistatud erinevatest ainetest vastavalt erinevate mikroobide kasvu vajadustele, mida kasutatakse erinevate mikroorganismide kultiveerimiseks või eraldamiseks.Seetõttu peaks toitainete maatriks sisaldama toitaineid (sh süsinikuallikas, lämmastikuallikas, energia, anorgaaniline sool, kasvufaktorid) ja vett, mida saavad kasutada mikroorganismid.Sõltuvalt mikroorganismide tüübist ja katse eesmärgist on söötme tüüpe ja valmistamismeetodeid erinevad.

Mõnda katses levinud söötme tutvustatakse järgmiselt:

Toitumisagar sööde:

Toiteagar söödet kasutatakse tavaliste bakterite paljundamiseks ja kasvatamiseks, bakterite üldarvu määramiseks, bakteriliikide säilitamiseks ja puhaskultuuriks.Peamised koostisained on: veiseliha ekstrakt, pärmiekstrakt, peptoon, naatriumkloriid, agaripulber, destilleeritud vesi.Peptoon ja veiselihapulber pakuvad lämmastiku-, vitamiini-, aminohappe- ja süsinikuallikaid, naatriumkloriid suudab säilitada tasakaalustatud osmootset rõhku ja agar on söötme koagulant.

Toiteagar on kõige elementaarsem söötme tüüp, mis sisaldab enamikku mikroobide kasvuks vajalikest toitainetest.Toitumisagarit saab kasutada tavapäraseks bakterikultuuriks.

Vere agari sööde:

Veriagar sööde on teatud tüüpi veiselihaekstrakti peptooni sööde, mis sisaldab defibrineeritud loomaverd (tavaliselt küüliku- või lambaverd).Seetõttu võib see lisaks erinevatele bakterite kasvatamiseks vajalikele toitainetele anda ka koensüümi (näiteks faktor V), heemi (faktor X) ja muid spetsiaalseid kasvufaktoreid.Seetõttu kasutatakse verekultuuri söödet sageli teatud toitumisnõudlike patogeensete mikroorganismide kultiveerimiseks, isoleerimiseks ja säilitamiseks.

Lisaks kasutatakse hemolüüsi testiks tavaliselt vereagarit.Kasvuprotsessi ajal võivad mõned bakterid toota hemolüsiini, et purustada ja lahustada punaseid vereliblesid.Kui nad kasvavad vereplaadil, võib koloonia ümber täheldada läbipaistvaid või poolläbipaistvaid hemolüütilisi rõngaid.Paljude bakterite patogeensus on seotud hemolüütiliste omadustega.Kuna erinevate bakterite poolt toodetav hemolüsiin on erinev, on erinev ka hemolüütiline võime ning erinev on ka hemolüüsi nähtus vereplaadil.Seetõttu kasutatakse bakterite tuvastamiseks sageli hemolüüsi testi.

TCBS sööde:

TCBS on tiosulfaattsitraat-sappsoola sahharoosiagar sööde.Patogeense vibrio selektiivseks isoleerimiseks.Peptooni ja pärmiekstrakti kasutatakse söötmes põhitoitainetena, et pakkuda lämmastikuallikat, süsinikuallikat, vitamiine ja muid bakterite kasvuks vajalikke kasvufaktoreid;Naatriumkloriidi kõrgem kontsentratsioon võib rahuldada vibrio halofiilse kasvu vajadusi;sahharoos kääritatava süsinikuallikana;Naatriumtsitraat, kõrge pH-ga aluseline keskkond ja naatriumtiosulfaat pärsivad soolebakterite kasvu.Lehma sapipulber ja naatriumtiosulfaat pärsivad peamiselt grampositiivsete bakterite kasvu.Lisaks annab naatriumtiosulfaat ka väävliallika.Raudtsitraadi juuresolekul võivad bakterid tuvastada vesiniksulfiidi.Kui esineb vesiniksulfiidi tootvaid baktereid, tekib plaadile must sete;TCBS söötme indikaatorid on bromokresoolsinine ja tümoolsinine, mis on happe-aluse indikaatorid.Bromokresoolsinine on happe-aluse indikaator, mille pH muutus on vahemikus 3,8 (kollane) kuni 5,4 (sinakasroheline).On kaks värvimuutuse vahemikku: (1) happe vahemik on pH 1,2–2,8, muutudes kollasest punaseks;(2) Leelise vahemik on pH 8,0–9,6, muutudes kollasest siniseks.

TSA juustu sojaoa peptoonagar sööde:

TSA koostis on sarnane toitaineagari koostisele.Riiklikus standardis kasutatakse seda tavaliselt bakterite settimise testimiseks ravimitööstuse puhastes ruumides (piirkondades).Valige testitavas piirkonnas katsepunkt, avage TSA plaat ja asetage see katsepunkti.Proove võetakse õhu käes kauem kui 30 minutit erinevatel aegadel ja seejärel kultiveeritakse kolooniate loendamiseks.Erinevad puhtuse tasemed nõuavad erinevat kolooniate arvu.

Mueller Hintoni agar:

MH sööde on mikroobne sööde, mida kasutatakse mikroorganismide resistentsuse tuvastamiseks antibiootikumide suhtes.See on mitteselektiivne sööde, millel võib kasvada enamik mikroorganisme.Lisaks võib koostisainetes sisalduv tärklis absorbeerida bakterite eralduvaid toksiine, mistõttu see ei mõjuta antibiootikumide kasutamise tulemusi.MH-söötme koostis on suhteliselt lahtine, mis soodustab antibiootikumide difusiooni, nii et sellel on ilmne kasvu inhibeerimise tsoon.Hiina tervishoiutööstuses kasutatakse MH söödet ka ravimitundlikkuse testimiseks.Mõne spetsiaalse bakteri, nagu Streptococcus pneumoniae, ravimitundlikkuse testi läbiviimisel võib söötmele erinevate toitumisvajaduste rahuldamiseks lisada 5% lambaverd ja NAD-i.

SS agar:

SS-agarit kasutatakse tavaliselt Salmonella ja Shigella selektiivseks isoleerimiseks ja kultiveerimiseks.See pärsib grampositiivseid baktereid, enamikku kolibakteritest ja proteusidest, kuid ei mõjuta salmonella kasvu;Vesiniksulfiidi tekke tuvastamiseks kasutatakse naatriumtiosulfaati ja raudtsitraati, mis muudab kolooniakeskuse mustaks;Neutraalne punane on pH indikaator.Hapet tootva kääriva suhkru koloonia on punane ja mittekääriva suhkru koloonia on värvitu.Salmonella on värvitu ja läbipaistev koloonia musta keskosaga või ilma ning Shigella on värvitu ja läbipaistev koloonia.