Tsentrifuugitoru on lihtne toru, mis talub suurt pöörlemiskiirust ja rõhku, näiteks mõne proovi eraldamine ja supernatandi setete eraldamine.Ultrafiltratsiooni tsentrifuugitorus on kaks osa, mis sarnanevad sisemise ja välimise toruga.Sisemine toru on teatud molekulmassiga membraan.Kiire tsentrifuugimise ajal lekivad väiksema molekulmassiga torud alumisse katsutisse (st välimisse torusse) ja suurema molekulmassiga torud jäävad ülemisse torusse (st sisemisse torusse).See on ultrafiltrimise põhimõte ja seda kasutatakse sageli proovide kontsentreerimiseks.
Ultrafiltratsiooni tsentrifuugitorusid saab tavaliselt kasutada ilma eeltöötluseta, kuid valguproovide töötlemisel, eriti lahjendatud valgulahuste puhul (< 10 ug/ml), ei ole ultrafiltreerimismembraanidega kontsentratsiooni taastumise kiirus sageli kvantitatiivne.Kuigi PES-materjalid vähendavad mittespetsiifilist adsorptsiooni, võivad mõnedel valkudel, eriti kui need on lahjendatud, olla probleeme.Mittespetsiifilise seondumise määr varieerub sõltuvalt üksikute valkude struktuurist.Laetud või hüdrofoobseid domeene sisaldavad valgud seostuvad suurema tõenäosusega pöördumatult erinevate pindadega.Ultrafiltratsioonitsentrifuugi toru pinna passiveerimise eeltöötlus võib vähendada valgu adsorptsiooni kadu membraani pinnal.Enamikul juhtudel võib kolonni eeltöötlus enne lahjendatud valgulahuse kontsentreerimist parandada taastumiskiirust, kuna lahus võib täita membraanil ja pinnal avatud tühjad valgu adsorptsioonikohad.Passiveerimismeetodiks on kolonni eelleotamine suurema mahu passiveerimislahusega üle 1 tunni, kolonni põhjalikult pestakse destilleeritud veega ja seejärel tsentrifuugitakse seda üks kord destilleeritud veega, et eemaldada täielikult kile jääv passiveerimislahus. .Olge ettevaatlik, et kile pärast passiveerimist ei kuivaks.Kui soovite seda hiljem kasutada, peate lisama steriilset destilleeritud vett, et kile oleks niiske.
Ultrafiltratsiooniga tsentrifuugitorusid ei saa tavaliselt steriliseerida ja uuesti kasutada.Kuna ühe toru hind pole odav, proovivad paljud seda taaskasutada – kogemus on membraanipinda mitu korda destilleeritud veega puhastada ja korra-paar tsentrifuugida.Väikese toru, mida saab tagurpidi tsentrifuugida, saab kasta destilleeritud vette ja seejärel tsentrifuugida tagurpidi mitu korda, mis on parem.Seda saab kasutada sama proovi jaoks korduvalt ja seda võib leotada destilleeritud vees, kui seda ei kasutata, kuid tuleb vältida bakteriaalset saastumist.Ärge segage erinevaid proove.Mõned inimesed ütlevad, et leotamine 20% alkoholis ja 1n NaOH-s (naatriumhüdroksiid) võib takistada bakterite kasvu ja takistada kuivamist.Kuni ultrafiltratsioonimembraan tungib vette, ei tohi sellel kuivada lasta.Teised aga ütlevad, et see hävitab membraani struktuuri.Igal juhul tootjad üldiselt taaskasutust ei toeta.Korduv kasutamine blokeerib filtri membraani pooride suuruse ja põhjustab isegi vedeliku leket, mis mõjutab katsetulemusi.
Postitusaeg: 05.05.2022